马力欧（克里斯·帕拉特 Chris Pratt 配音）和路易吉（查理·戴 Charlie Day 饰）是生活在布鲁克林的两名水管工，他们刚刚成立了自己的小公司，但很显然，他们的家人并不完全支持兄弟两人的这份事业。某日，在工作中，马力欧和路易吉被水管吸入到了一个光怪陆离的世界之中，两人在旅途中被迫分开，马力欧来到了由碧姬公主（安雅·泰勒-乔伊 Anya Taylor-Joy 配音）统治的蘑菇王国，而路易吉则不幸的被传送到了由酷霸王（杰克·布莱克 Jack Black 配音）统治的库巴王国。
此时，酷霸王正准备大举进攻蘑菇国，掳走公主并和她结婚，在这个节骨眼上，马力欧的出现带给了碧姬公主希望，她带着马力欧来到了丛林王国，请求那里的国王和王子（塞斯·罗根 Seth Aaron Rogen 饰）的支援。
究竟是什么塑造了真正的你？电影将聚焦乔伊·高纳（杰米·福克斯配音）。这位中学音乐老师获得了梦寐以求的机会——在纽约最好的爵士俱乐部演奏。但一个小失误把他从纽约的街道带到了一个奇幻的地方“生之来处”（the Great Before）。在那里，灵魂们获得培训，在前往地球之前将获得他们的个性特点和兴趣。决心要回到地球生活的乔伊认识了一个早熟的灵魂“二十二”（蒂娜·菲 配音），二十二一直找不到自己对于人类生活的兴趣。随着乔伊不断试图向二十二展示生命的精彩之处，他也将领悟一些人生终极问题的答案。
